Pacbio測序（壹）

Pabio主要發布三個測序儀，RSII實體比較大，Sequel平臺在節約了大量的光學檢測部件的空間以後，原來外置的數據處理器Blade Center與主機合二為壹，內置於下部空間，成為壹個整體，其體積減小至只有原來的1/3。相對於Illumina Hiseq的體積也小11%。重量也從過去的壹噸多到現在的不足400kg。

相比之下，Illumina或者Ion Torrent測的都是壹簇分子。Sequel平臺利用單分子實時測序技術，又稱作SMRT（Single Molecule Real-Time）測序，其實是基於ZMW孔（零模波導孔，Zero-Mode Waveguides）的單分子讀取技術，sequel無需擴增，可以可快速完成序列讀取。

pacbio sequel II升級後單個芯片數據通量是原來的8倍

Pacbio文庫構建的模板是啞鈴形狀，啞鈴形狀的文庫有壹個好處，它整個分子實際上是壹個圓環。在測序的過程中它可以周而復始地進行測序，這不僅有利於發揮PacBio的長讀長的優勢，同時有利於多個pass矯正隨機錯誤率。

pacbio建庫流程如下：

DNA鏈鉚釘在即零模波導孔底部，和模板互補的dNTP被聚合酶抓住，短暫的結合，被激光照射，發出熒光，熒光轉化為堿基信號；鏈繼續延伸，結合的dNTP的熒光基團脫落，完成了壹個小循環，反應反復進行。

pacbio測序的應用範圍：

（1）全基因組de novo測序

（2）全長轉錄本測序

（3）宏基因組測序

（4）結構變異檢測

（5）表觀遺傳學

（6）目標區域測序

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