打開google 首頁,搜索VecScreen,進入VecScreen首頁,復制序列,運行,View report。
二、結果:
輸出序列長度918bp,
載體序列的區域456bp——854bp.
克隆載體:M13mp18 phage,pGEM-13Zf(+),pBR322,pRKW2。
2、使用相應工具,分析下列未知序列的重復序列情況,輸出重復序列的區域、包含的所有重復序列的類型、重復序列的總長度及Masked Sequence。
壹、步驟:
進入google首頁,進入ICBI主頁,對序列進行BLAST。得出序列是human的。
進入google首頁,搜索RepeatMasker,進入RepeatMasker主頁,進入RepeatMasking,復制序列,DNA source選擇human,運行!點擊超鏈接,在結果中選擇
Annotation File :RM2sequpload_1287631711.out.html
3、使用CpGPlot/CpGReport/Isochore工具,分析下列未知序列,輸出CpG島的長度、區域、GC數量、所占的百分比及Obs/Exp值。壹、步驟:
進入google首頁,搜索CpGPlot,進入CpGPlot主頁,program中選擇cpgreport復制序列,運行!
二、結果:
CpG島的長度:385bp
區域:48——432;
GC數量:Sum C+G=297,百分數=77.14
Obs/Exp:1.01
4、預測下面序列的啟動子,輸出可能的啟動子序列及相應的位置。壹、步驟:
進入google首頁,進入ICBI主頁,對序列進行BLAST。得出序列是human的
進入google首頁,搜索Neural Network Promoter Prediction,進入主頁,復制序列,選擇eukaryote,運行!
二、結果:
位置:711—761 ,1388—1438,1755—1805;
5、運用Splice Site Prediction工具分析下面序列,分別輸出內含子-外顯子剪接位點給體和受體的區域及剪接處位置的堿基。壹、步驟:
進入google首頁,進入ICBI主頁,對序列進行BLAST。得出序列是human的
進入google首頁,搜索Splice Site Prediction,進入主頁,復制序列。Organism選擇Human or other。其他默認,運行!
二、結果:
供體:
受體:
6、對下面序列進行六框翻譯,利用GENESCAN綜合分析(首先確定給定序列的物種來源)哪個ORF是正確的,輸出六框翻譯(抓圖)和GENESCAN結果(包括predicted genes/exons 和 predicted peptide sequence(s) 兩個部分)。壹、步驟:
進入google首頁,進入ICBI主頁,對序列進行BLAST。得出序列是Zea的
進入google首頁;搜索NCBI,進入主頁,選擇all resources(A~Z),選擇O,選擇ORF finder。復制序列,默認,運行!
二、結果:ORF圖
三、步驟:進入google首頁,搜索GENESCAN,進入主頁,Organism:Maize, ,其他默認,運行!
四、結果:
G7、進入REBASE限制性內切酶數據庫,輸出AluI、MboI、EcoI三種內酶的Recognition Sequence和Type。
壹、步驟:進入google首頁,google in English,搜索REBASE,進入主頁, 分別輸入AluI、MboI、EcoI,運行!
在MboI中選擇第壹個,EcoI選擇第二個。
二、結果:
ENSCAN圖
8、使用引物設計工具,針對下列未知序列設計壹對引物,要求引物長度為20-25bp,擴增產物長度300-500bp,退火溫度為50-60℃。請寫出選擇的壹對引物(Forward Primer and Reverse Primer)、及相應的GC含量、引物的位點、Tm值和產物長度。壹、步驟:進入google首頁,搜索genefisher,進入主頁,復制fasta格式,chechk input, sunmit, ; ;設置壹下引物長度為20-25bp,擴增產物長度300-500bp,退火溫度為50-60℃; 。
二、結果:
GC含量:
引物的位點:
Tm值:
產物長度:。
9、將下面的序列用NEBcutter 2.0工具分析,用產生平末端及有四個酶切位點的酶進行酶切,並用抓圖提交膠圖(view gel),要求1.4% agarose和Marker為100bp DNA Ladder。
壹、步驟:
進入google首頁,進入ICBI主頁,對序列進行BLAST,得知是linear。
進入google首頁,搜索NEBcutter 2.0,進入主頁,選擇linear,運行!選擇custom digest, ,把“1”改為“4”,選擇平末端,後digest。View gel。選擇1.4% agarose和Marker為100bp。
二、結果:
然後就是蛋白質的了壹般都在expasy裏swiss-prot 適用於檢索的 compute pi/mw 求理論分子量 分子量 protparam物理化學性質 protscale親水性疏水性 peptidemass分析蛋白酶和化學試劑處理後的內切產物
NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)-GenBank數據庫
數據庫相似性搜索——核酸序列與核酸數據庫比較(BLASTN)
蛋白質序列與數據庫中蛋白質序列比較(BLASTP)
兩序列比對(Align two sequences)
DNA序列分析——ORF Finder(www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html)
分析實驗序列外顯子部分——GENSCAN(/NEBcutter2/index.php)
註: Custom digest -- view gel
限制性內切酶數據庫——REBASE(/rebase/rebase.html)
設計引物擴增實驗序列——Genefisher
Primer 3
蛋白質序列分析及結構預測:
1.預測蛋白質的分子量及等電點:ExPASy(Compute pI/Mw)
2.分析蛋白質的基本物理化學性質:ExPASy(ProtParam)
3.分析蛋白質的親水性和疏水性:ExPASy(ProtScale)
4.分析蛋白質在各種蛋白酶和各種化學試劑處理後的內切產物:ExPASy(PeptideMass) [* :kinase K]
5.分析蛋白質的信號肽:ExPASy(SignalP)
6.預測蛋白質的二級結構:ExPASy(Jpred 3)
多物種分子系統發育分析:EMBL(www.ebi.ac.uk/embl/)--Toolbox--Clustal2W
人脂聯素蛋白質序列:NP_004788
人類胰島素生長因子IB前體:P05019