點文件,選新建DNA序列(File——New——DNASeqence)然後把要設計引物的序列復制進去就行了(如果妳要是願意也可以壹個壹個堿基的打進去),然後點Primer進入到引物設計界面,進去後選點Search設置相應相應的條件,如:妳要設計PCR擴增還是測序引物,是正向、反向還是雙向,在片段中的那個位置設計及引物的長度等等,設置好後壹路OK點下去就行了,然後就會有引物出來供妳選擇了。
哈哈不過具體的步驟1L那個網址好像已經給出了,不過在設計引物時LZ還要註意些條件,如TM值和GC壹類的,還有引物長度等等^_^
反正我壹般設計引物的時候TM和GC都控制在50-60之間,長度壹般18或19個堿基(555合成的時候按堿基收費呀555),錯配和發卡都沒有,不過引物二聚體有的話問題倒是不大(反正我設計出來有二聚體的引物基本都OK)然後就是最好不要有4個或以上連續的堿基,再有就是不要在重復序列裏設計引物。
只要註意以上這些的話設計出的引物那裏測序或擴增都OK
呵呵希望對LZ有所幫助
如何用PRIMER5.0設計引物進入軟件,genetank窗口file---new----DNAsequence進入序列輸入版塊。然後control+v輸入序列,如不改變序列,選擇AS菜單。
然後進入primer引物設計。進入search,點OK。系統自動生成引物。
選妳需要的就可以了。(有評分)。如要克隆基因,則在primer菜單下手動設計。
PrimerPremier5.0引物設計壹、PCR引物設計原則
二、PrimerPremier5.0軟件設計引物
三、引物設計步驟
①輸入序列:安裝好軟件後,首先打開軟件,左上角來操作,file-new-dnasequence,這壹項可以把復制的序列粘貼進去,也可以選擇另壹個file-open-dnasequence去open壹個新的文件。②點擊Primer進入引物設計界面。③點擊引物設計界面上的search按鈕進行搜索選項設定。④點擊搜索選項界面上的OK按鈕可得到引物設計結果。⑤選擇分值高的引物對作為實驗合成引物選項。⑥根據需要對引物進行編輯。