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RNA提取原理

RNA提取原理用Trizol的溶液提取,將總RNA與DNA和蛋白質分離。Trizol是壹種酸性溶液,含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質和RNase變性。隨後進行離心。在酸性條件下,總RNA保留在上層水相中,而大部分DNA和蛋白質保留在中間相或下層有機相中。然後通過用異丙醇沈澱回收總RNA。RNase酶可以通過加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)來滅活。

RNA提取時,加氯仿後分三層:水相(含rna,可能還有少量DNA),中間白色薄層(應該是蛋白和DNA),下層有機相(氯仿和蛋白等)

氯仿是分子量比較大的有機溶劑,在提取RNA時,氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。DNA提取過程有機相中主要是酚和蛋白結合,從而使得蛋白和DNA脫離,DNA進入水相。但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離,否則DNA會釋放到水相。不管有酚也好,沒有酚也好,氯仿本身也對蛋白有變性作用,劇烈的震蕩,很容易使得DNA的親水基團,與水相接觸。所以不要劇烈震蕩。

異丙醇的作用是通過-OH的疏水作用使得RNA或者DNA鏈中的親水基團受到保護,等同於沈澱,但是這是個反應時發生在水相中,與前面的氯仿不矛盾。

細胞中還有許多種類和功能不壹的小型RNA,像是組成剪接體的snRNA,負責rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調節基因表達。而其他如I、II型內含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。

在各種生物活動中,RNA起著至關重要的作用。脫氧核糖沒有2‘-OH.RNA的2‘-OH中的O(氧原子)可以在氫氧根(水)和氫結合的時候靠近3’碳原子下面的磷酸基團形成包含5個***價鍵的P(5個P-O)。

RNA和DNA屬於核酸,加上脂質、蛋白質和碳水化合物。核糖的2位碳上連有羥基為RNA的壹個重要結構特點。這類羥基使得RNA雙鏈的結構應與A型構象最接近,不過,在單鏈的某些二核苷酸環境下,也有極小的可能形成DNA最常見的B型螺旋構象。

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