酶蛋白的質量測定

酶蛋白濃度的測定方法:嚴格來說，酶濃度是指酶分子的質量濃度，常用酶蛋白濃度來表示。人體體液中有數百種酶。除脂多糖、LCAT、膽堿酯酶和銅氧化酶(CER)外，大多數酶的含量甚至更低，在微克/升水平。因此，酶活性濃度的測定是主要的測定方法。20世紀70年代以來，隨著新技術特別是免疫學技術的發展，在酶的定量分析技術中出現了許多新方法，這些方法通過抗原抗體反應直接確定酶蛋白的質量。國內外測定酶濃度的方法有電泳法、柱層析法和免疫化學法，其中免疫化學法應用較為廣泛。免疫化學法是利用酶蛋白的抗原性制備特異性抗體，然後用免疫學方法測定酶濃度。用於酶濃度測定的免疫化學方法包括免疫抑制、免疫沈澱、放射免疫分析(RIA)、化學發光免疫分析(CLIA)、酶免疫分析(EIA)、熒光酶免疫分析(FEIA)等。其中，前兩種方法可用於測定酶活性濃度，其他方法可用於測定酶蛋白濃度。如免疫抑制法測定CK-MB的活性，免疫沈澱法測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性。胰蛋白酶和彈性蛋白酶用放射免疫法測定，CK-MB用CLIA法測定，神經元特異性烯醇化酶用ELISA法測定。

CK-MB是診斷AMI和測量心肌梗死面積的重要指標。國外在評價AMI的診斷效率時，往往是確定CK-MB的質量，即確定CK-MB的質量。CK-MB質量的測定通常是制備抗CK-M抗體和抗CK-B抗體或使用CK-MB抗體，用CLIA、ELISA、FEIA等方法測定。這些方法適用於臨床自動分析，並具有測定時間短(最早7min)和靈敏度高(最低檢測限

由於酶濃度的測定方法不同，報告方法也有差異:酶活性濃度的單位常以U/L報告，酶質量濃度的單位常直接以ng/ml或Mg/L報告，臨床醫生應註意不同報告方法造成的差異。免疫化學法測定酶蛋白濃度的優缺點與傳統的測定酶活性的方法相比，免疫化學法具有以下優點:①靈敏度高，可達到ng/L至μg/L的水平，可測定其他方法難以檢測到的少量或微量的酶；②特異性高，幾乎不受體液中其他物質如酶抑制劑、激活劑的影響，不受藥物幹擾；③可用於某些不顯示酶活性的酶蛋白的酶測定，如各種酶原或脫輔基蛋白，或因遺傳變異而合成無活性的酶蛋白和失活的酶蛋白；④在某些情況下，結合酶活性測定計算特異性免疫活性，可以提供更多具有臨床應用和研究價值的新數據和信息。⑤特別適用於同工酶的測定。

酶的免疫化學測定也有其局限性。主要表現為:①往往難以制備足夠的純化酶作為抗原和具有免疫化學性質的抗血清，工作量很大；②測定步驟多，操作復雜；③測定成本高。因此，必須掌握免疫化學技術，掌握抗原抗體復合物形成的最佳條件，不斷降低成本，才能保證測定結果的準確性，並廣泛應用於臨床。

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